您现在的位置是:洞察電訊 > 自然之美
如涉及作品内容、版权等问题
洞察電訊2025-08-01 09:54:42【自然之美】2人已围观
简介2 结果与分析2.1 茉莉花原生质体分离体系的优化为了分离到足够量、有活力的茉莉花原生质体,本试验采用酶解法,针对不同组织器官、不同处理方式、酶解液组合、酶解时间等因素进行了摸索和优化。2.1.1 不
2 结果与分析
2.1 茉莉花原生质体分离体系的茉莉优化
为了分离到足够量、有活力的花原茉莉花原生质体,本试验采用酶解法,针对不同组织器官、不同处理方式、生质时表酶解液组合、体瞬酶解时间等因素进行了摸索和优化。达体
2.1.1 不同处理方式对茉莉花原生质体分离的建立及影响
借鉴拟南芥和番茄叶片原生质体制备方法,初步尝试从茉莉花叶片分离原生质体,然而得到的原生质体多为细胞碎片,且形状异常,FDA染色大部分无荧光,显示存活率极低(图1-A,B)。然而,茉莉以茉莉花花瓣为试材时,在相同的酶解液中可收集到形态良好,FDA处理发荧光,有活力的原生质体(图1-C,D),因此在接下来的研究中须专注于优化茉莉花花瓣的原生质体分离体系。
尝试了用切丝法、花原胶撕法和磨砂法在酶解前分别对花瓣组织进行处理(图2-A,生质时表B,C),以使花瓣细胞能充分接触酶解液。在4m1相同酶解液中孵育6h后,体瞬收集观察原生质体产量,在3次独立重复试验中均显示切丝法获得的原生质体数量最多,胶撕法次之,磨砂法得到的原生质体产量最低(图3)。考虑到操作的达体简易性,切丝法处理茉莉花花瓣对原生质体分离最有效。
2.1.2 酶液组合和酶解时间对茉莉花原生质体分离的建立及影响
在含4G·1-1离析酶和2G·1-1果胶酶的酶解液中梯度增加纤维素酶的质量浓度从5至30G·1-1,检测结果显示(图4-A),在一定浓度范围内,原生质体产量随纤维素酶质量浓度提高而增加,当浓度为15G·1-1时,原生质体产量达到峰值,为1.34×106个·G-1,死亡率为29.1%;随着纤维素酶质量浓度继续升高,原生质体产量和活力都开始下降,细胞破碎程度严重。因此,茉莉分离茉莉花花瓣原生质体较适宜的纤维素酶质量浓度为15G·1-1。在含4G·1-1离析酶和15G·1-1纤维素酶的花原酶解液梯度增加果胶酶的质量浓度从2至10G·1-1,花瓣原生质体产量检测结果显示(图4-B),随果胶酶浓度升高,原生质体产量同步增加,当果胶酶质量浓度为8G·1-1时,原生质体产量最高,为1.48×106个·G-1,死亡率较低,为31.0%,较适宜花瓣原生质体的分离.试验表明,酶解液中最佳的纤维素酶和果胶酶质量浓度分别为15和8G·1-1。
为进一步优化茉莉花花瓣原生质体的生质时表分离效率,选取4个酶解时间段3、4、5、6h,采用上述优化后的酶解液组合,检测释放出来的原生质体总量及死亡率。如图4-C所示,随着酶解时间延长,原生质体产量逐步增多,在酶解5h时,原生质体产量最高,达到2.96×106个·G-1,死亡率为23.5%,相对较低.因此最适合酶解时间为5h。
2.2茉莉花原生质体瞬时转化体系的优化
本研究进一步采用PEG介导法,探讨了原生质体终浓度、外源dnA含量、不同PEG处理等对茉莉花花瓣原生质体瞬时转化效率的影响。
将收集的花瓣原生质体稀释成不同终浓度的细胞液,经相同的转化方法和孵育时间,荧光显微镜下统计原生质体转化效率,结果如图5-A所示,相同转化体系中,外源dnA含量为100μG·m1-1原生质体时,最适合转化的茉莉花花瓣原生质体浓度为4×105个·m1-1,转化效率约78%。
向原生质体浓度为4×105个·m1-1的转化体系中加入不同量的P35s-GFP质粒,经相同的PEG处理和孵育时间,结果如图5-B所示,当转化体系中dnA含量为75μG·m1-1原生质体时,转化效率最佳,约为79%。
本研究分析了不同终浓度的PEG4000对茉莉花花瓣原生质体转化效率的影响(图5-C)。在终浓度为200G·1-1的PEG处理下花瓣原生质体的转化效率显著高于其他浓度,其次是150和250G·1-1的PEG终浓度,50G·1-1PEG处理下原生质体转化效率最低。
为进一步优化转化体系,本试验还比较了PEG诱导时间对原生质体转化效率的影响(图5-D)。PEG处理时间在10min以内,原生质体转化效率均达到70%以上,当处理时间超过15min,转化效率显著降低。
声明:本文所用图片、文字来源《福建农业大学学报》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系
相关链接:茉莉酮,±茉莉酸,茉莉香精,纤维素酶,果胶酶
很赞哦!(58)
下一篇: 重磅!GB 5009.305
站长推荐
友情链接
- Chanel 将在12月中旬宣布新任创意总监的人选
- Tommy 22秋冬大片演绎时尚 绽放童年光彩
- 美国对玻璃基板部分终裁,国际动态
- 《白茶产地溯源技术规程 近红外光谱法》国家标准 编制说明
- 6月15日,这5项国家生态环境标准正式实施
- 付“现金”返“摩豆” “摩捷出行”被指强制消费
- Shein与Temu将接受英国议会听证会质询
- NOCTA携手L'ART DE L'AUTOMOBILE打造复古赛车风格联名系列
- 山东省放心消费全域创建启动
- 福建发布建材行业“十四五”节能降碳实施方案,行业资讯
- 柳州发布疫情防控期间价格违法行为认定处理指导意见
- 福建严控外卖风险 落实“非接触式”送餐服务
- 虚假宣传药物疗效 北京密云一药店领到罚单
- 莆田启动住宅装修改造补贴活动
- 凌源超薄玻璃生产线项目开工建设,行业资讯
- 重庆:允许销售未在境内上市的医用口罩
- 洛小米童装 可爱 是孩子们本真的语言
- 上海崇明区严格管控家庭办酒 筑牢农村疫情防控战线
- 玻璃刀裁切玻璃注意什么 正确使用玻璃刀操作方法,行业资讯
- 最高被罚100万!河北公布第九批疫情防控期间违法典型案件
- 宁夏银川:成立党员先锋突击队防控疫情
- 辽宁:打击非法制售抗疫防护用品 查获问题口罩10万只
- 吉林:允许紧急进口未在国内注册医疗器械
- 江苏旧房装修、厨卫改造补贴政策落地 最 高补贴3万元
- 打好防疫阻击战 武汉市市场监管部门多措并举保民生
- 哈尔滨x波司登战略成果发布:致敬冰雪 共绘时尚新章
- 备孕前禁止检查的项目及注意事项:关键信息你需要了解!
- 玻璃绝缘子测量电阻大小 盘式绝缘子是哪种绝缘子,行业资讯
- 全国要点监测浮法玻璃企业六月快报数据综合统计显示: 价格环比上升,同比下降,产业数据
- 宁夏石嘴山启动农贸市场“驻场监管”模式抗击疫情
- 安装玻璃吊顶要注意什么 玻璃吊顶该怎么安装固定,行业资讯
- 商店销售75%消毒酒精哄抬价格被处罚 山东公布一批违法案件
- 湖北省市场监管局曝光9起疫情防控典型案例
- 七彩芽 爱的织锦 绘就烂漫纯真的童年画卷
- 没买玻璃险也可以理赔吗 汽车玻璃哪些不可以理赔,行业资讯
- 让问题口罩无处藏身!浙江查处曝光一批口罩违法典型案例
- 双层玻璃圆桌茶几怎么装 玻璃茶几有哪些安装方法,行业资讯
- 老铺黄金逆势崛起 文化灵感金饰掀起市场潮流
- “凝聚你我力量 共同抗击疫情”倡议书
- 2019年7月31日浮法玻璃产能利用率及库存天数,产业数据